2023 लेखक: Bryan Walter | [email protected]. अंतिम बार संशोधित: 2023-05-21 22:25
सीएआर टी लिम्फोसाइट कैंसर सेल पर हमला करता है
अमेरिकी शोधकर्ताओं ने एक ऐसे जीन की खोज की है जो टी-लिम्फोसाइटों की कमी में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। प्रयोगशाला चूहों पर एक प्रयोग में, इस जीन को हटाने से काइमेरिक एंटीजन रिसेप्टर्स के साथ लिम्फोसाइटों का उपयोग करके सबसे आशाजनक कैंसर इम्यूनोथेरेपी की प्रभावशीलता में वृद्धि हुई। परिणाम जर्नल फॉर इम्यूनोथेरेपी ऑफ कैंसर में प्रकाशित हुए हैं।
काइमेरिक एंटीजन रिसेप्टर (सीएआर) तकनीक का सिद्धांत यह है कि विदेशी कोशिकाओं की पहचान के लिए आवश्यक मूल रिसेप्टर कॉम्प्लेक्स (टीसीआर + सीडी 3) को एक व्यक्ति के अपने साइटोटोक्सिक टी-लिम्फोसाइटों में एक विशेष प्रकार के कैंसर के लिए विशिष्ट सीएआर के साथ बदल दिया जाता है।.. ऐसे कृत्रिम रिसेप्टर्स को काइमेरिक कहा जाता है क्योंकि उनमें विभिन्न मूल के मॉड्यूल होते हैं: एक ट्यूमर एंटीजन की पहचान के लिए एक मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (scFv) का एक टुकड़ा, एक काज क्षेत्र, एक सक्रिय डोमेन (CD3ζ), साथ ही साथ विभिन्न संयोजक, अभिव्यक्ति नियामक, और अन्य ट्रांसजेन। रोगी के रक्त से सीएआर-टी-लिम्फोसाइट्स प्राप्त करने के लिए, उसकी अपनी कोशिकाओं को लिया जाता है, एक वायरल वेक्टर का उपयोग करके, काइमेरिक रिसेप्टर के मिश्रित जीन को उनमें पेश किया जाता है, एक पोषक माध्यम पर खेती की जाती है और शरीर में वापस इंजेक्ट किया जाता है। वहां, ट्रांसजेनिक लिम्फोसाइट्स ट्यूमर को पहचानते हैं और सक्रिय होते हैं, इसकी कोशिकाओं पर हमला करते हैं और साइटोकिन्स जारी करते हैं - इंटरफेरॉन (IF-γ), ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर α (TNF-α) और अन्य जो विभिन्न प्रतिरक्षा कोशिकाओं को आकर्षित करते हैं। आप हमारे लेख "कैंसर अगेंस्ट कैंसर" में सीएआर तकनीक के बारे में अधिक पढ़ सकते हैं।
पारंपरिक (बाएं) और काइमेरिक (दाएं) रिसेप्टर्स के साथ टी-लिम्फोसाइट्स और लक्ष्य कोशिकाओं के साथ उनकी बातचीत
नैदानिक परीक्षणों में, सीएआर-टी लिम्फोसाइट्स कैंसर का पूर्ण इलाज प्राप्त करने और कई रोगियों में इसके पुन: विकास को रोकने में सक्षम रहे हैं। हालांकि, इस तरह की सफलता मुख्य रूप से रक्त नियोप्लाज्म के साथ हासिल की गई थी। शरीर के अन्य ऊतकों के कैंसर को हराना अधिक कठिन हो गया; इसका एक मुख्य कारण ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट में लिम्फोसाइटों की तेजी से कमी थी। इस तरह की घटी हुई कोशिकाएं धीरे-धीरे साइटोकिन संश्लेषण (IF-γ, TNF-α) और कैंसर कोशिकाओं के विनाश जैसे प्रभावकारी कार्यों को खो देती हैं, और निरोधात्मक रिसेप्टर्स PD1, Tim3 और LAG3 भी व्यक्त करती हैं। पिछले अध्ययनों से पता चला है (1, 2) कि ubiquitin ligases के E3 परिवार से नियामक प्रोटीन Cbl-b की कमी ट्यूमर अस्वीकृति से जुड़ी है, मुख्य रूप से साइटोटोक्सिक टी-लिम्फोसाइटों की गतिविधि के कारण; हालाँकि, इसमें इसकी सटीक भूमिका है प्रक्रिया अनिर्दिष्ट रही।
इस मुद्दे की जांच करने और सीबीएल-बी के लिए चिकित्सीय क्षमता का निर्धारण करने के लिए, यूनिवर्सिटी ऑफ टेक्सास साउथवेस्टर्न मेडिकल सेंटर के वेणुप्रसाद पुजारी के नेतृत्व में कई शोध केंद्रों के वैज्ञानिकों के एक समूह ने प्रयोगशाला प्रयोगों की एक श्रृंखला आयोजित की।
सबसे पहले, शोधकर्ताओं ने टी-लिम्फोसाइटों को चूहों में कृत्रिम रूप से इनोक्यूलेटेड कोलन कैंसर के फॉसी से अलग किया और रीयल-टाइम पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन और इम्यूनोब्लॉटिंग का उपयोग करके उनके आरएनए का विश्लेषण किया। उन्होंने दिखाया कि PD1 और टिम 3 रिसेप्टर्स (PD1 + टिम 3 +) को व्यक्त करने वाली घटी हुई कोशिकाएं गैर-अपूर्ण (PD1-Tim3-) की तुलना में काफी अधिक Cbl-b (p = 0.00005) उत्पन्न करती हैं।
फिर प्रयोगकर्ताओं ने CRISPR-Cas9 तकनीक का उपयोग करके पृथक एंटीट्यूमर PD1 + Tim3 + T-लिम्फोसाइटों में CBLB जीन एन्कोडिंग Cbl-b को बंद कर दिया। इसने साइटोकिन्स IF-γ, TNF-α, इंटरल्यूकिन -2 (IL-2) और साइटोटोक्सिक एंजाइम ग्रैनजाइम B (GrB) के उत्पादन को समाप्त कोशिकाओं में बहाल कर दिया।
विवो में सीबीएल-बी के प्रभावों का अध्ययन करने के लिए, संबंधित जीन के (सीबीएलबी + / +) और कमी (सीबीएलबी - / -) वाले चूहों को कैंसर भ्रूण प्रतिजन (सीईए) को व्यक्त करने वाले कोलन कैंसर कोशिकाओं के साथ टीका लगाया गया था, जो कई का बायोमार्कर है। मानव विकृतियां।यह पता चला कि सीबीएलबी - / - चूहों में ट्यूमर बहुत अधिक धीरे-धीरे बढ़ता है (पी = 0, 001) और साइटोटोक्सिक टी-लिम्फोसाइटों द्वारा अधिक दृढ़ता से घुसपैठ किया जाता है। इन जानवरों में PD1 + Tim3 + T लिम्फोसाइट्स (18.4 बनाम 45.6 प्रतिशत) बहुत कम थे और CBLB + / + चूहों की कोशिकाओं के विपरीत, साइटोकिन्स और GrB को संश्लेषित करने की क्षमता को बनाए रखा।
Cbl-b. के बिना चूहों में ट्यूमर के विकास को सीमित करना
Cbl-b के चिकित्सीय मूल्य का आकलन करने के लिए, शोधकर्ताओं ने hCEAscFv-CD28-CD3ζ. GFP काइमरिक एंटीजन रिसेप्टर के साथ माउस CBLB + / + और CBLB - / - T लिम्फोसाइट्स प्रदान किए जो मानव CEA (hCEA) को पहचानते हैं। परिणामी सीएआर टी कोशिकाओं को इस प्रतिजन को व्यक्त करने वाले कोलन कैंसर चूहों में इंजेक्ट किया गया था। CBLB - / - CAR-T प्राप्त करने वाले जानवरों ने CBLB + / + सेल थेरेपी की तुलना में बेहतर उत्तरजीविता और छोटे ट्यूमर के आकार को दिखाया और कोई इलाज नहीं किया।
ट्यूमर से पृथक CAR-T लिम्फोसाइटों में, CBLB - / - ने CBLB + / + (4–6 बनाम 30–35 प्रतिशत) की तुलना में काफी कम "कमी" दिखाया। इसके अलावा, उन्होंने बाद के विपरीत, संस्कृति में कैंसर कोशिकाओं को नष्ट करने और IF-γ, TNF-α और GrB को संश्लेषित करने की क्षमता को बरकरार रखा। इस प्रकार, CBLB को हटाने से CAR-T कोशिकाओं की एंटीट्यूमर गतिविधि प्रबल हो जाती है, शोधकर्ताओं ने निष्कर्ष निकाला।
चूंकि टी-लिम्फोसाइटों में सीबीएल-बी की कमी ऑटोइम्यून बीमारियों के विकास से जुड़ी है, काम के लेखकों ने थेरेपी के साथ इलाज किए गए चूहों के प्लीहा, बृहदान्त्र, फेफड़े और यकृत का एक अतिरिक्त रूपात्मक और ऊतकीय अध्ययन किया। CBLB + / + और CBLB - / - दोनों कोशिकाओं के साथ क्षति के कोई संकेत नहीं देखे गए।
सभी प्रयोगों में, परिणामों का सांख्यिकीय महत्व p <0.05 के रूप में निर्धारित किया गया था।
Cbl-b जीन को हटाकर CAR-T लिम्फोसाइटों की दक्षता में सुधार करना
"हमारा शोध विभिन्न अंगों में ट्यूमर को लक्षित करने के लिए सीएआर टी कोशिकाओं के विकास की दिशा में एक महत्वपूर्ण कदम का प्रतिनिधित्व करता है। [यह दृष्टिकोण] कुछ मौजूदा कैंसर इम्यूनोथेरेपी रणनीतियों की सीमाओं को दूर कर सकता है,”पुजारी ने कहा।
वर्तमान में, विभिन्न शोध दल सीएआर-टी-लिम्फोसाइट अनुप्रयोग के नए क्षेत्रों की तलाश कर रहे हैं और उनकी दक्षता बढ़ा रहे हैं। न केवल ऑन्कोलॉजी में, बल्कि वायरल संक्रमणों के उपचार में और यहां तक कि सेलुलर उम्र बढ़ने के खिलाफ लड़ाई में भी कुछ सफलताएं हासिल की गई हैं।
